3.結果與討論


3.1.分離株的分離與鑒定


嬰兒糞便中的LAB計數范圍從4 x 10^6 CFU/g到2 x 10^10 CFU/g，并且在配方奶喂養的嬰兒中更高。共回收了109株LAB分離株，即82株來自母乳喂養，9株來自配方奶喂養，18株來自混合喂養。根據其RAPD-PCR譜對分離株進行區分，隨后通過幾個基因（16S、cpn60、pheS和/或sodA）的測序進行物種鑒定。因此，鑒定出60種不同的RAPD指紋譜，并分配了一個基因型（表2）。


從109株LAB分離株中，乳酸桿菌屬是最主要的屬，占分離株的48%。鑒定出的乳酸桿菌物種是加氏乳酸桿菌（21%）、類干酪乳酸桿菌/副干酪乳酸桿菌（10%）、發酵乳酸桿菌（9%）、鼠李糖乳酸桿菌（5%）、口乳酸桿菌（2%）和陰道乳酸桿菌（1%）。還檢測到腸球菌屬、鏈球菌屬和魏斯氏菌屬的成員（分別為38%、11%和3%），包括糞腸球菌（所有腸球菌分離株）、巴氏鏈球菌（5%）、唾液鏈球菌（3%）、盧特鏈球菌（2%）、解沒食子酸鏈球菌（2%）和類腸膜魏斯氏菌（3%）（表2）。其他作者顯示糞腸球菌是從1天大的新生兒糞便中分離的主要物種。


物種 喂養類型 母乳 配方奶 混合 總基因型數
n 基因型 n 基因型 n 基因型
加氏乳酸桿菌 19 6 1 1 0 0 8
類干酪/副干酪乳酸桿菌 11 6 2 2 3 1 6
發酵乳酸桿菌 0 0 0 0 8 4 4
鼠李糖乳酸桿菌 1 1 0 0 1 1 3
口乳酸桿菌 2 1 1 1 2 0 1
陰道乳酸桿菌 0 0 0 0 0 0 1
糞腸球菌 35 23 2 2 4 2 27
巴氏鏈球菌 4 3 0 0 1 1 3
唾液鏈球菌 1 1 1 1 0 0 1
盧特鏈球菌 1 1 0 0 1 1 2
解沒食子酸鏈球菌 1 1 0 0 0 0 1
類腸膜魏斯氏菌 2 1 0 0 1 1 3

在乳酸桿菌中，加氏乳酸桿菌是出生后頭2個月最常分離的物種（30%），其次是發酵乳酸桿菌、類干酪乳酸桿菌/副干酪乳酸桿菌和口乳酸桿菌（分別為9%、3%和3%）。然而，在2個月以上年齡，類干酪乳酸桿菌/副干酪乳酸桿菌占主導地位（25%），其次是發酵乳酸桿菌、鼠李糖乳酸桿菌和陰道乳酸桿菌（分別為25%、11%、8%和3%）。加氏乳酸桿菌在女性陰道微生物群中很常見（Vasquez等人，2002），并且在分娩期間觀察到陰道乳酸桿菌可能定植新生兒（Matsumiya等人，2002）。此外，鑒于大多數采樣的糞便來自母乳喂養的嬰兒，并且在該組中加氏乳酸桿菌是最主要的乳酸桿菌物種，母乳可能是加氏乳酸桿菌的另一個來源。在這方面，Martin等人進行的一項研究顯示，從母乳和嬰兒糞便中分離出具有相同RAPD-PCR模式的加氏乳酸桿菌。與我們的結果一致，Xanthopoulos等人從嬰兒糞便中分離出副干酪乳酸桿菌亞種副干酪乳酸桿菌、鼠李糖乳酸桿菌和加氏乳酸桿菌。Solis等人發現加氏乳酸桿菌是從10到90天齡新生兒糞便中分離的乳酸桿菌中的主要物種。同樣，Ahrne等人報道鼠李糖乳酸桿菌和加氏乳酸桿菌是出生后頭2個月糞便中最常分離的物種。


3.2.潛在益生菌菌株的技術和安全表征


進一步表征以篩選用于發酵香腸的潛在益生菌培養物，重點關注不同的乳酸桿菌菌株（n=23），因為它是所有分離株中在發酵香腸中最具技術相關性的屬。人類LAB分離株已被測試其作為斯堪的納維亞型發酵香腸（Klingberg等人，2005）和伊比利亞干發酵香腸（Ruiz-Moyano等人，2008）益生菌培養物的適用性。據報道，腸道來源是選擇益生菌菌株的相關標準，因為它們可能預期在與其原始分離環境相似的環境中功能更好（Saarela等人，2000）。然而，在益生菌選擇中也應考慮技術方面，如性能和存活能力以納入肉制品，因為它們應能夠與內生肉微生物群競爭（De Vuyst等人，2008）。因此，在補充了用于制作發酵香腸的不同成分和添加劑的MRS肉湯中進行的Bioscreen C生長測定顯示，大多數測試的23株乳酸桿菌菌株能夠在37°C下在MRS-c和MRS-Nit中生長，但只有18株能夠在37°C下在MRS-Salt中生長，盡管與MRS-c和MRS-Nit相比，生長速率和檢測時間（TTD）通常分別降低和增加（圖1）。

圖1：乳酸菌菌株在37°C下于MRS-c、MRS-Nit和MRS-Salt中的生長速率和檢測時間。NG：無生長。


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