除艱難梭菌標準菌株(Cdiff_TS)外,所有細菌均在含葡萄糖的各自培養基中生長良好。然而,雙歧桿菌標準菌株(Bbif_TS)、動物雙歧桿菌乳亞種(B. lactis)Bi-07(Blac_Bi-07)、嗜酸乳桿菌標準菌株(Laci_TS)及短乳桿菌Lbr-35(Lbre_Lbr-35)相比其他研究菌株生長較弱。多數細菌在商業GOS培養基中生長良好,而HMOs DFL和2'-FL是最具選擇性的碳水化合物利用來源,其次是3-FL。


表3:商業Bimuno GOS粉末(GOS-c)和純化GOS-p溶液的組成
碳水化合物 Bimuno GOS GOS-p
HPLC組分1:DP4和/或更高 9.9 18.4
HPLC組分2:DP4和/或更高 16.3 31.5
HPLC組分3:DP3 32.6 42.5
HPLC組分4:DP2 35.8 7.7
葡萄糖 4.9 未檢測到
半乳糖 0.5 未檢測到

注:使用材料與方法部分描述的HPLC方法分析組成。結果以曲線下面積(面積%)給出,即峰面積相對于所有檢測到的峰總面積的百分比。DP=聚合度;HPLC=高效液相色譜;GOS=低聚半乳糖;GOS-p=純化的富含寡糖的低聚半乳糖。


雙歧桿菌的生長。

圖2. 碳源對雙歧桿菌生長的影響。通過生長曲線下面積(AUC)評估雙歧桿菌在1% 2'-巖藻糖基乳糖(2'-FL)、3-巖藻糖基乳糖(3-FL)、二巖藻糖基乳糖(DFL)、巖藻糖(Fuc)、商業低聚半乳糖(GOS-c)、富集低聚糖的GOS(GOS-p)、乳糖(Lac)和葡萄糖(Glu)存在下的生長情況。AUC值通過減去細菌在未添加碳水化合物的生長培養基中培養的孔穴AUC值進行標準化。菌株根據相似生長模式進行聚類。AUC生長數據采用顏色編碼,從深紅色表示強烈生長(AUC 1000-1700;500-999;200-499;100-199;36-99;0-35)到深藍色表示生長弱于基礎培養基(AUC-110至-1)。所有菌株縮寫列表參見表2。


所有雙歧桿菌碳水化合物利用分析的結果以熱圖形式顯示在圖2中。此處,每種細菌的每種碳源的AUC值減去了相應未添加碳水化合物的培養基的AUC值。雙歧桿菌菌株也根據其生長模式的相似性進行了聚類。圖2-4中的生長強度通過顏色表示,范圍從藍色(表示生長低于生長培養基,AUC-110至-1)、無生長(AUC 0-35)、極弱生長(AUC 36-99)、弱生長(AUC 100-199)、生長(AUC 200-499)、強生長(AUC 500-999)到劇烈生長(AUC 1000-1700),用紅色表示。


雙歧桿菌擁有大量碳水化合物代謝基因庫。HMOs的利用是將雙歧桿菌分為兩個主要簇的主要因素。在我們的研究中,嬰兒雙歧桿菌Bi-26、兩歧雙歧桿菌Bb-06(Bbif_Bib-06)和假小鏈雙歧桿菌模式菌株(Bpse_TS),以及嬰兒雙歧桿菌模式菌株(Binf_TS,ATCC 15697),都能在2'-FL、3-FL和DFL上良好生長。此外,兩種短雙歧桿菌菌株也與上述菌株聚在一起,很可能是由于在GOS-c和乳糖上生長穩健,并且在3-FL上生長微弱。


嬰兒雙歧桿菌有幾個ABC轉運蛋白,其中兩個(FL1-BP和FL2-BP)是將巖藻糖基化HMOs攝取到細胞內所必需的,在細胞內它們被細胞內的糖苷水解酶降解。糖苷水解酶GH29(1,3-和1,4-α-L-巖藻糖苷酶)和GH95(1,2-α-L-巖藻糖苷酶)對于將巖藻糖從巖藻糖基乳糖上分離是必需的。與先前的研究結果一致,我們的結果顯示嬰兒雙歧桿菌模式菌株(Binf_TS)在巖藻糖基化HMOs作為唯一碳源時生長良好。嬰兒雙歧桿菌Bi-26(Binf_Bi-26)在2'-FL上的生長先前已有描述,在這里,我們也證實了該菌株在3-FL和DFL上的生長,正如先前觀察到的。兩歧雙歧桿菌在細胞表面具有糖苷水解酶,使其能夠細胞外降解HMOs和粘蛋白結構,導致單糖和二糖在細胞外水解,可能促進交叉喂養。兩歧雙歧桿菌也是雙歧桿菌中少數能夠利用粘蛋白的菌株之一。與Thongaram等人和Garrido等人的發現相似,兩歧雙歧桿菌模式菌株(Bbif TS)在我們的實驗中未在任何測試的HMOs上生長,并且碳源上的總體生長較弱。然而,益生菌兩歧雙歧桿菌菌株Bb-06(Bbif_Bib-06)在2'-FL、3-FL和DFL上生長良好,這一特性先前在其他兩歧雙歧桿菌菌株中也得到證實。


巖藻糖基化HMOs的轉運蛋白以及降解它們所必需的糖苷水解酶可以在一些(10%)但非所有研究的假小鏈雙歧桿菌菌株中找到。我們在此研究的假小鏈雙歧桿菌模式菌株(Bpsa_TS)在巖藻糖基化HMOs上生長良好,并且其基因組包含一個a-L-巖藻糖苷酶基因。短雙歧桿菌菌株已被報道含有GH95 a-L-巖藻糖苷酶;然而,它們通常也需要GH29才能在巖藻糖基化HMOs上生長。


短雙歧桿菌菌株在乳糖-N-四糖和LNnT上表現出一致的生長,而在巖藻糖基化HMOs上的生長似乎是菌株特異性的。我們在此研究的短雙歧桿菌模式菌株(Bbre_TS)和菌株Bb-03(Bbre_Bb-03)未在2'-FL或DFL上生長,盡管在3-FL上觀察到輕微生長。在這項研究中,我們逐一評估了細菌菌株的生長,這為在更復雜的細菌群落中HMOs的利用提供了指示。Lawson等人最近研究了嬰兒雙歧桿菌分離株對HMOs的利用,發現一些能夠利用HMOs的菌株可以通過交叉喂養促進不能利用HMOs的菌株的生長。因此,由于不同雙歧桿菌之間HMOs利用模式的差異,更復雜的細菌群落可能會被改變。


屬于青春雙歧桿菌、短雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌和長雙歧桿菌的其他11種雙歧桿菌菌株均不能在2'-FL、DFL或巖藻糖上生長,但它們在GOS(商業和純化形式)、葡萄糖和乳糖上生長良好。長雙歧桿菌模式菌株和益生菌長雙歧桿菌菌株Bl-05(Blon_Bl-05)未在3-FL上生長,而在青春雙歧桿菌、乳雙歧桿菌和鏈狀雙歧桿菌菌株中觀察到3-FL上的輕微生長。3-FL測試產品包含2.5%的乳糖,而2'-FL和DFL的HMO含量均高于99%,這可能影響了結果,因為乳糖是比巖藻糖基化HMOs更容易發酵的糖。然而,這種現象在所研究的細菌菌株中并不一致。


在早期的一項研究中,雙歧桿菌物種和菌株對兩種GOS產品及其商業和純化版本的利用方式不同。在不同長度、糖苷鍵和分支的GOS結構利用方面,已發現菌株依賴性差異。此外,青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌和乳雙歧桿菌已被證明對不同GOS結構的利用方式不同。在我們的研究中,所有雙歧桿菌在兩種GOS產品上都生長相對良好;然而,GOS-c和GOS-p之間的生長存在一些小的菌株依賴性差異。類似地,Watson等人發現GOS支持大多數所研究雙歧桿菌的生長。


葡萄糖、乳糖和GOS在所研究的雙歧桿菌中被廣泛利用,這與巖藻糖不同,后者通常不被雙歧桿菌利用。此外,我們的數據支持了先前關于HMOs利用在雙歧桿菌屬中具有高度選擇性的發現。


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